微生物实验室的布局

微生物检查必须在无菌的环境中进行，以保持样品的原污染状态，防止第二次污染，所谓的无菌环境是指用物理的或化学的方法，在某个可控的室内使微生物的数量降低到最低限度，接近于无菌的空间。

在未普遍采用现代化的无菌隔离器技术之前，无菌室仍是最常用的无菌环境之一。

无菌室及配套的相关建筑应充分考虑其合理布局、操作方便、使用安全等条件。

一、 环境

微生物实验室应远离交通干道、厕所及污染区，应选上、下水道及其他安装适宜的位置。无菌室的配套设施包括洗刷、培养基配制、消毒灭菌、物品存放（灭菌与有菌应分开），培养间、结果观察间、细菌（真菌）间、办公室等，布局要合理、集中，便利管理和使用。

二、 无菌室

微生物检验应有专用的无菌操作间，如微生物检查、无菌检查、抗生素（抗生素微生物检查）、抗生素效价、毒素（如黄曲霉毒素）、细菌（真菌）等检验应有独立的检验空间，不可混用，以避免彼此干扰或交叉污染。

1. 无菌室内部布局
无菌室应具备2个缓冲间和独立的无菌操作间，应有人流和物流的设施，操作间面积不小于5m2、高不超过2.4m、温度控制在18～26℃、相对湿度为40%～60%。

新鲜空气经初效、中效和高效过滤后进入缓冲间和无菌操作间，无菌操作间应保持与环境形成正压；与工作间环境大气静压差不低于4.5Pa，与室外大气静压差不低于10Pa。洁净度环境应不低于10 000级、局部应不低于100级。

2. 无菌室（无菌操作间）要求

无菌室内部应六面光滑、平整、无缝隙、不起灰、耐腐蚀、易清洗，墙与地面、台面、墙壁之间连接处应是凹弧形，不留死角，室内不得按上、下水道，出入缓冲间和操作间的门不应直对，室内的电源开关应设在室外，温、湿度和压差显示计应设在室外。

无菌室采光的面积要大，照明灯应嵌装在天花板内，光照应分布均匀，光照度不低于300lx，缓冲间和操作间均应安装紫外杀菌灯（2～2.5W/m3），距实验台面高度不超过1m。并应定期检查辐射照度，不应低于70µW/cm2（1m距离）。

3. 灭菌（或净化）措施

室内空气净化常用的方法有管道输入过滤的无菌空气，通过净化器净化无菌室的空气。

三、 无菌检查用隔离系统

隔离器技术是一种有别于普通洁净室的特殊设施，适于无菌试验和无菌取样。

无菌隔离器不受环境污染的影响，是一种配有完整的高效过滤板（HEPA）、层流通风过滤器的独立式封闭空间，该隔离系统可用化学消毒剂过氧乙酸、过氧化氢蒸气或其他消毒剂杀菌，使其保持高度无菌状态。

无菌检查用隔离器又分为封闭式隔离器和开放式隔离器。

封闭式隔离器不直接与外界环境相连，使用无菌接口或快速转移通道进行物质传递，一般用于无菌检查；开放式隔离器允许材料通过舱门进入，舱门内有一定的压力阻止微生物的进入。

物品可通过无菌传递进入隔离器，整个传递过程中可保持隔离器内部空间和外部环境完全隔离。

2015年版《中国药典》四部新增无菌检查用隔离系统验证指导原则（通则9206）。

该指导原则是为药典要求无菌的药品、生物制品、原料、辅料，及其他品种无菌检查用隔离系统的验证提供指导。

 1. 操作性能验证

 证明所有报警功能均能按照设定的要求正常工作；证明隔离系统可按设定参数值运行。

 2. 隔离器完整性验证

 隔离器在正常运行条件下应能保持良好的完整性。 隔离器的高效空气过滤器（HEPA）也需定期进行完整性检测。

 泄漏测试：验证设备完整性是否达到制造商的要求。

 压差验证：为避免外来污染，正常操作时隔离器维持正压，压差为20～50Pa验证隔离器在动态条件下维持正压差的能力。

 3. 灭菌验证

 隔离器内表面、隔离器内部的设备及进入隔离器的各种物料都应经过处理以降低隔离器微生物负载。

 可使用某种合适的、高抗性的生物指示剂来验证。完全灭菌法应采用每单位106孢子数的生物指示剂，而阴性对照应该采用每单位孢子数不少于106 孢子数的生物指示剂。

 使用合适数量的生物指示剂进行试验可以从统计学上证明灭菌效果是可以再现以及灭菌剂的分布是否合适。尤其要注意那些灭菌剂浓度较低的地方，隔离器内物品和设备满载时需要用更多的生物指示剂进行试验。

 灭菌程序的确定要经过3次连续的验证且能使生物指示剂下降超过6个对数值。

 常用灭菌的气体是过氧化氢，使用嗜热脂肪芽孢杆菌进行灭菌验证。

 4. 灭菌循环验证

 运行一个灭菌循环，以确认灭菌循环各阶段实际运行值与其设定值是否相符。

 5. 隔离器内部洁净度验证

 隔离器内部的洁净环境应进行验证，其悬浮粒子（静态的）和微生物应达到我国现行药品生产质量管理规范中A级空气洁净度的要求。

 6. 隔离器通风时间的验证

 在灭菌后，应对灭菌气体的浓度进行检测，保证隔离器内的灭菌气体残留量低于可接受值。

 7. 仪器仪表的验证

 须对隔离器配置的仪器仪表，如H2O2传感器、温湿度传感器、压力传感器等进行定期校验。

 8. 再验证

 应按下述条件对无菌检查用隔离器进行再验证：

 隔离器出现运行异常；

 运行程序、运行参数变更；

 无菌检查隔离器安装场地变更等。

 再验证应按照文件化的程序及规定的可接受标准实施再验证。再验证的结果应形成记录并保存。

 9. 包装完整性验证

 进入隔离器的物品应进行灭菌，减少进入隔离器物品的生物负荷量。

 包装的完整性防止灭菌剂的浸入、保证包装表面灭菌效果、可降低灭菌剂浓度及缩短灭菌周期，但必须经过验证，建议用化学和微生物挑战试验来检测包装物对污染的抵制能力。

 杀菌剂对于细菌和真菌杀菌效果需要进行验证试验。